(1)，即碘将二氧化硫氧化为三氧化硫过程需要水分的参与。
注意，式(1)反应为可逆反应，为使其向正反应方向进行完全，在卡氏液中加入无水吡啶，使得式(1)反应产物HI与SO3被定量吸收，形成氢碘酸吡啶和硫酸酐吡啶，如式(2)。
然而，式(2)反应产物硫酸酐吡啶不稳定，可与水发生副反应，因此加入无水甲醇，形成稳定的甲基硫酸氢吡啶，如式(3)。
吡啶和甲醇还可作为反应溶剂。
卡尔费休试剂的配制
根据上述反应原理，卡尔费休滴定液组成为：
游离碘、二氧化硫、无水吡啶、无水甲醇。商业化卡尔费休试剂包含多种不同类型，适用于不同的样品，包括无吡啶型、无甲醇(乙醇代替)型、加入萃取剂如氯仿型等。
《中国药典》中卡氏液配制方法如下：
称取碘(置硫酸干燥器内48小时以上)110g，置干燥的具塞锥形瓶(或烧瓶)中，加无水吡啶160ml，注意冷却，振摇至碘全部溶解，加无水甲醇300ml，称定重量，将锥形瓶(或烧瓶)置冰浴中冷却，在避免空气中水分侵人的条件下，通入干燥的二氧化硫至重量增加72g，再加无水甲醇使成1000ml，密塞，摇匀，在暗处放置24小时。
上述卡氏滴定液各化合物摩尔比：碘：二氧化硫：无水吡啶 = 1.0 :2.6 : 4.7；
式(3)水与各化合物作用的摩尔比：水：碘：二氧化硫：甲醇：吡啶 = 1 : 1 : 1 : 1 : 3
由此：卡氏液中二氧化硫过量，而碘则完全反应。为何不是碘过量呢？这与卡氏滴定的终点指示方法有关。
